瓜伊多1983年出生於委內瑞拉巴加斯州（現為拉瓜伊拉州）首府拉瓜伊拉。2007年，他在委內瑞拉安德烈斯·貝略天主教大學獲得工業工程學位。2009年，瓜伊多參與創建人民意志黨。2018年12月，瓜伊多被選為反對派控制的委內瑞拉議會主席，並於2019年1月5日宣誓就職。
2018年5月，馬杜羅在委內瑞拉總統大選中成功連任，但美國以“民主”和“人權”為幌子，拉攏盟友，與委反對派一起，拒絕承認馬杜羅政府的合法性。2019年1月23日，瓜伊多當上議會主席沒多久，便自封為“臨時總統”。當天，美國宣布承認瓜伊多自封的身份，並對他公開表示支持。馬杜羅隨即宣布委內瑞拉與美國斷交。
為逼迫馬杜羅下台，美國一方面給瓜伊多搭台，為其提供資助，另一方面以外交孤立、經濟制裁和軍事威脅等手段向馬杜羅政府施壓，目的是將瓜伊多扶上台。在美國裹挾下，50多個國家及歐盟陸續承認瓜伊多的所謂“合法總統身份”。
事實上，美國對瓜伊多這類“代理人”的物色和培養很早就已經開始。據中國外交部公布的《關於美國國家民主基金會的一些事實清單》披露，在1999年查韋斯就任委內瑞拉總統後，美國國家民主基金會（NED）就加緊暗箱操作，持續向委內瑞拉反對派提供資金，以邀請人員訪美形式組織集中培訓。2005年，瓜伊多等5名委“學生領袖”就曾接受NED資助，參加所謂“起義”訓練。瓜伊多隨後在美留學進修期間，也一直在NED支持下活躍在美國相關政治團體中。
事實證明，美方的培訓確有“針對性”。2019年4月30日凌晨，瓜伊多出現在委首都加拉加斯東部一處空軍基地附近。瓜伊多在社交媒體上號召軍人和民眾走上街頭，企圖煽動軍事政變。
當天，時任美國國務卿蓬佩奧在社交媒體上為瓜伊多搖旗呐喊：“臨時總統瓜伊多宣布開始自由行動。美國政府全力支持委內瑞拉人民追求自由和民主。”
美國前總統國家安全事務助理博爾頓2022年5月在一場智庫活動中談及美國對馬杜羅政府的顛覆行動。他說：“唯一的遺憾是我們沒有成功，儘管我們很接近。”
軍事政變沒成功，瓜伊多領導的“臨時政府”又在美國支持下試圖發動“顔色革命”，煽動年輕人舉行針對馬杜羅政府的暴力抗議活動，一度給委安全穩定帶來嚴重衝擊。據委官方統計，2019年上半年，持續數月的暴力抗議在這個南美國家造成數百人傷亡，經濟損失高達上百億美元。
持續的暴力活動沒有實現推翻馬杜羅政府的目標。隨著瓜伊多幾次奪權嘗試均以失敗告終，他在委反對派內部的支持率持續下降，美國國內不少人也開始質疑在他身上“下注”是否明智。2022年，隨著烏克蘭局勢升級，全球能源供應緊張，價格飆漲，美國注意力轉向，對瓜伊多的態度發生轉變。
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